Jogo rápido da detecção do antígeno do sangue inteiro, jogo do teste da casa do antígeno 150-250ul

Com o instrumento médico do IVD para fazer o jogo rápido de neutralização do teste do anticorpo SARS-CoV-2

Jogo de neutralização do teste de Fluerescent do anticorpo & teste rápido de neutralização do anticorpo

O ensaio deneutralização do anticorpo foi executado como descrito anteriormente (5). Momentaneamente, aspilhasdeVeroforam semeadasem96placasboaspara produzirummonolayerna alturadainfecção. AsquantidadesdePretitratedderVSV-SARS-Cov-2[phCMV3-SARS-CoV-2opontoSARS-CoV-2-pseduotypedVSV-ΔG-GFP(proteínafluorescenteverde)foi geradotransfectingaspilhasdeHEK293T, ATCCCRL-3216]foram incubadascomplasmahumanoem sériediluídoem37°Cpara1horaantesdeadicionaraosmonolayersdepilhaconfluentesdeVero(ATCCCCL-81)em96placasboas. Aspilhasforam incubadaspor12a16horasem37°Cem5%CO2.As pilhas foram fixadas então no paraformaldehyde de 4%, manchado com 1 μg/ml Hoechst, e imaged usando um tonalizador de CellInsight CX5 para determinar o número total de pilhas que expressam GFP. A infecção foi normalizada ao número médio de pilhas contaminadas com rVSV-SARS-CoV-2 incubou com plasma humano normal. O LOD foi estabelecido como <1:20 on="" the="" basis="" of="" plasma="" samples="" from="" a="" series="" of="" unexposed="" control="" subjects=""> 50(os titers da concentração inibitório mediana) foram calculados usando a regressão do ajuste LogIC50 do Um-local no prisma 8,0 de GraphPad.

Um ensaio fluorescência-baseado alto-taxa de transferência da neutralização

Para preencher a diferença para o serodiagnosis COVID-19 e a avaliação da vacina, nós desenvolvemos um ensaio fluorescência-baseado que medisse rapidamente e confiantemente a neutralização de um repórter SARS-CoV-2 por anticorpos dos espécimes pacientes. O ensaio foi construído em um estábulo mNeonGreen (mNG) SARS-CoV-2 onde o gene do mNG foi projetado no ORF7 do genoma viral (Fig. 1a)10. A sequência completa do mNG SARS-CoV-2 é descrita no figo suplementar. 1. A figura 1b descreve o fluxograma do ensaio da neutralização do repórter em um formato 96 bom. O protocolo do ensaio é detalhado em métodos suplementares. Momentaneamente, os soros pacientes em série foram diluídos e incubados com o vírus do repórter. Após a incubação em 37°C para 1   h, as pilhas de Vero CC-81 (pre-semeadas em uma placa 96 boa) foram contaminadas com as misturas do vírus/soro em uma multiplicidade da infecção (MOI) de 0,5. Em uma cargo-infecção de 16   h, as pilhas mNG-positivas foram dosadas usando um leitor da imagem latente do alto-índice (Fig. 1b). Deve-se notar que as pilhas de Vero CC-81, não pilhas de Vero E6, estiveram escolhidas para o mNG analisam para permitir a quantificação exata de pilhas fluorescentes. Sessenta espécimes do soro COVID-19 dos pacientes RT-PCR-confirmados e 60 das amostras do soro non-COVID-19 (arquivados antes da emergência COVID-19) foram analisados usando o vírus do repórter. Para espécimes de algum COVID-19-positive, o positivo cargo-viral dos dias RT-PCR da coleção da amostra estava disponível e é indicado na tabela Table1.1. Após a infecção viral do repórter, as pilhas giraram o verde na ausência do soro (Fig. 1c, do painel inferior); ao contrário, a incubação do vírus do repórter com o soro COVID-19 paciente diminuiu o número de pilhas fluorescentes (painel superior). Uma curva da dose- foi obtida entre o número de pilhas fluorescentes e a dobra da diluição do soro (Fig. 1d e do figo suplementar. 2), que permitiu a determinação da dobra da diluição que neutralizou 50% de pilhas fluorescentes (NT50). O ensaio do repórter diagnosticou rapidamente 120 espécimes dentro de 24   h: todos os 60 soros COVID-19 (espécimes 1-60) mostraram NT positivo50de 35 a 5711, e de todos os 60 soros non-COVID-19 (espécimes 61-120) mostrou NT negativo50de <20> 1).

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